回答與轉基因植物的培育和植物克隆有關的問題：
（1）農桿菌介導法是目前植物轉基因技術的常用方法。使用該方法需先獲取活性強的農桿菌菌液，再通過冰浴、離心、去上清液等相應的溶液處理，最后加入適量預冷的含15%甘油的

CaCl₂

CaCl₂

溶液，制成感受態農桿菌細胞。
（2）目的基因和質粒的正確連接是否成功與多種因素有關，為提高重組質粒的形成效率，可用兩種不同的限制性核酸內切酶處理含目的基因的DNA片段和質粒，在具有足量酶且其他環境條件適宜的反應體系中，還需要考慮到

限制性核酸內切酶和DNA連接酶（工具酶）的處理時間、加入目的基因與質粒的比例

限制性核酸內切酶和DNA連接酶（工具酶）的處理時間、加入目的基因與質粒的比例

（答出2點即可）等因素，再分離得到高純度的重組質粒。
（3）將感受態農桿菌細胞的菌液和高純度的重組質粒在離心管內輕緩混合后，將離心管置于液氮中速凍5min迅速轉移至37℃水浴靜置5min,再轉移至冰浴中靜置5min,這一系列操作的目的是

有利于重組質粒進入細胞中

有利于重組質粒進入細胞中

，可以提高轉化效率。若重組質粒中的標記基因是卡那霉素抗性基因，再加入適量的

A

A

（填序號），并在28～30℃的搖床上慢速振蕩培養1～2h,目的是讓菌體復蘇、表達抗體和

大量增殖

大量增殖

。
A.不含卡那霉素的LB培養液
B.含有適量卡那霉素的LB培養液
C.含有卡那霉素的人工培養液“199”
D.含有適量卡那霉素的MS培養基
（4）由于植物

細胞壁

細胞壁

（填細胞結構）的存在，植物的組織培養和克隆有一定難度，可以通過使轉化成功的農桿菌感染植物的原生質體來解決這一難題，將導入外源基因的原生質體培養成胚性細胞，胚性細胞繼續培養，可通過胚胎發生和器官發生兩條途徑形成轉基因植株，請簡要寫出其中一條從胚胎細胞到形成完整植株的途徑：

胚性細胞培養形成細胞團，經球形胚、心形胚和胚狀體，最后發育成植株（或胚性細胞培養形成細胞團，細胞團增殖為愈傷組織，先在發芽培養基上誘導生芽，再經過生根培養基誘導生根，形成完整植株）

胚性細胞培養形成細胞團，經球形胚、心形胚和胚狀體，最后發育成植株（或胚性細胞培養形成細胞團，細胞團增殖為愈傷組織，先在發芽培養基上誘導生芽，再經過生根培養基誘導生根，形成完整植株）

。