城市降雨徑流中含多種污染物，其中有機物多環芳烴（PAHs）具有極強生物毒性，常積累于路邊滯留池中，產生持久的生態風險。研究者構建了一種高效降解PAHs的工程菌用于生態修復。
（1）生態修復效果除受工程菌的降解能力限制外，還與工程菌和本地微生物之間的 競爭競爭等有關。研究者調研滯留池中PAHs種類，發現以芘為主。將滯留池土壤溶液接種于添加芘的培養基中，篩選獲得三種菌株，再分別接種于芘作唯一碳源的培養基中，均無法形成菌落，說明三者均對芘有一定的 耐受性耐受性，但無法降解芘。最終篩選獲得基因工程改造的受體菌。
（2）將控制高效降解PAHs的RHD基因與綠色熒光蛋白基因（CFP基因）融合后構建重組質粒，導入受體菌獲得工程菌。分別提取工程菌的擬核DNA與質粒，PCR結果如圖1，可知目的基因 從重組質粒整合至擬核DNA從重組質粒整合至擬核DNA。
（3）將工程菌培養在以芘為唯一碳源的培養基中，檢測熒光強度及芘含量隨時間的變化，結果如圖2。
據圖可知，熒光強度可作為工程菌降解芘的指標，依據是 隨著重組菌中的熒光強度增高，培養基中芘含量不斷下降隨著重組菌中的熒光強度增高，培養基中芘含量不斷下降。
（4）工程菌在特定條件下自毀可降低生態風險。利用以下材料，提出可自毀的工程菌的設計思路。
T質粒，核酸水解酶基因（nuc基因），lac啟動子，IPTG（可誘導lac啟動子啟動轉錄）
利用lac啟動子及nuc基因與T質粒構建重組載體，導入工程菌，需要時進行IPTG誘導，引發自毀利用lac啟動子及nuc基因與T質粒構建重組載體，導入工程菌，需要時進行IPTG誘導，引發自毀。
（5）后續評價了可自毀工程菌對微生物群落結構的影響。綜合上述研究，完善技術路線圖。 微生物群落結構→基因工程菌→安全性微生物群落結構→基因工程菌→安全性。
【答案】競爭；耐受性；從重組質粒整合至擬核DNA；隨著重組菌中的熒光強度增高，培養基中芘含量不斷下降；利用lac啟動子及nuc基因與T質粒構建重組載體，導入工程菌，需要時進行IPTG誘導，引發自毀；微生物群落結構→基因工程菌→安全性
【解答】
【點評】
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發布：2024/11/7 19:30:1組卷：48引用：1難度：0.6
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1．學習以下材料，回答（1）～（4）題。
利用抑制性tRNA進行無義突變遺傳病的治療
無義突變是由于某個堿基的改變使代表某種氨基酸的密碼子突變為終止密碼子（UAA、UAG或UGA），從而使肽鏈合成提前終止，造成蛋白質的功能改變，引發相關疾病。約有10%～15%的人類基因相關遺傳疾病是由無義突變引發的。常規的基因治療是將正常基因的cDNA序列或是有治療價值的基因（如CRISPR-Cas9相關的基因編輯工具）通過一定的方式導入人體靶細胞內，達到替代或修復缺陷基因、治療疾病的目的。導入基因插入位置不當、過高或過低表達，都可能會導致副作用。盡管基因編輯可以實現生理水平的基因表達，但基因編輯工具引入外源蛋白可能引發強烈的免疫反應仍然是巨大的挑戰。
抑制性tRNA（sup-tRNA）由天然tRNA改造而來，它的反密碼子通過堿基配對原則可以識別無義突變的終止密碼子，使得mRNA在翻譯至無義突變位點時不啟動翻譯終止而是繼續向后進行翻譯，獲得有功能的全長蛋白。
I型黏多糖貯積癥的病因，是相關基因發生無義突變，產生終止密碼子UAG。研究者構建小鼠該突變基因mldua和Flag基因融合的載體（圖1），以及針對該無義突變設計的sup-tRNA表達載體（產生的sup-tRNA能夠識別UAG并攜帶酪氨酸Tyr,簡寫作sup-tRNATyr），將其導入細胞進行研究，發現與具有相似作用的化合物G418比較，sup--tRNA的作用更加顯著（圖2）；進一步利用重組腺相關病毒作為載體將sup-tRNA導入患病小鼠模型中，實驗顯示能夠降低黏多糖過度積存，實現對該病癥的有效治療，其療效可以持續半年以上。
從整體來看，G418在促進跨越無義突變位點繼續翻譯時引入的氨基酸較為隨機，而sup-tRNA引入的氨基酸較為單一，且不會影響內源tRNA穩態，所以sup-tRNA在個體治療中具有很高的安全性，因而在未來基因突變引起的疾病相關治療中具有非常大的應用前景。
（1）侵染時，作為載體的重組腺相關病毒與靶細胞膜上的發生識別，引發內吞，進入細胞后釋放單鏈DNA作為模板，利用宿主細胞的催化合成其互補DNA鏈，再經過過程產生sup-tRNA。
（2）除了引入的氨基酸較為單一，不影響內源tRNA穩態，我們還可推斷，用于治療的sup-tRNA在正常終止密碼子處（填“能”或“不能”）繼續往后翻譯，具有很高的安全性。
（3）研究者構建mldua突變基因和Flag基因融合的載體，目的是通過檢測來確定是否跨越無義突變位點繼續向后翻譯。實驗結果表明，相比于化合物G418，sup-tRNA在促進無義突變位點的翻譯方面更加有效，支持這一結論的依據是：。
（4）有文獻報道，已在近1000個不同的人類基因中發現了7500多個無義突變。常規的基因治療需要為每種疾病設計獨特的治療策略，這將是一項耗費驚人的項目。據此說明sup-tRNA的應用價值。發布：2025/1/3 8:0:1組卷：28引用：1難度：0.6 -
2．人類基因組計劃測定了人體的24條染色體，這24條染色體是（ ）
發布：2024/12/31 0:30:1組卷：115引用：7難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，自然界有些植物能產生幾丁質酶催化幾丁質水解從而抵抗真菌感染。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入沒有抗性的植物體內，可增強其抗真菌的能力。如圖表示為獲取幾丁質酶基因而建立cDNA文庫的過程。
（1）圖示以mRNA為材料通過法獲得cDNA，該方法依據的原理是，通過這種方法獲得的基因中因缺乏和結構，導致將其直接導入受體細胞中不能復制和表達。
（2）與選用老葉相比，選用嫩葉更容易提取到mRNA，原因是，且提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（3）將從cDNA文庫中獲得的幾丁質酶基因和質粒載體用酶和DNA連接處理后連接起來，構建基因表達載體，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：5引用：1難度：0.7
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