2007年諾貝爾生理學或醫學獎授予在“基因靶向”技術方面作出突出貢獻的三位科學家。“基因靶向”技術指的是應用DNA同源重組原理，通過一定的載體，用設計好的目的基因替代靶基因，從而達到使靶基因功能喪失的目的。借助這一技術，科學家可以用小鼠進行實驗，使其體內的某項特定基因喪失功能，以幫助人們找到治療疾病的有效方法。下面是該實驗的基本過程，請回答有關問題。
（1）獲取目的基因。
①目的基因是靶基因的同源片段。經過修飾使靶基因的功能改變或喪失，就可獲得目的基因。如果要獲得活性降低了的X酶蛋白的目的基因，可以采用蛋白質工程技術，請簡述其過程。

X酶蛋白的功能分析→X酶蛋白的三維結構預測和設計→X酶多肽的氨基酸序列設計→X酶基因的改造

X酶蛋白的功能分析→X酶蛋白的三維結構預測和設計→X酶多肽的氨基酸序列設計→X酶基因的改造

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②為了提高實驗成功率，需要通過PCR技術獲得目的基因的大量拷貝。與體內DNA復制相比，PCR反應體系需加入哪兩種特別的物質？

兩種引物、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）

兩種引物、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）

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（2）構建基因表達載體。質粒是具有自我復制能力的雙鏈環狀DNA，它所具有的一至多個

限制酶切割

限制酶切割

位點，使目的基因插入其中成為可能，因此常被選作載體。
（3）將基因表達載體導入胚胎干細胞，從中篩選出成功發生了同源重組的胚胎干細胞，然后培育出小鼠。
（4）通過檢測目的基因是否表達出蛋白質產品，可以確定該小鼠體內是否成功發生了基因的同源重組。請簡述這種檢測方法。

提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原-抗體雜交

提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原-抗體雜交

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