微生物吸附是重金屬廢水的處理方法之一。金屬硫蛋白（MT）是一類廣泛存在于動植物中的金屬結合蛋白，具有吸附重金屬的作用。科研人員將棗樹的MT基因導入大腸桿菌構建工程菌。回答下列問題：
（1）根據棗樹的MTcDNA的核苷酸序列設計了相應的引物（圖1甲），通過PCR擴增MT基因。已知A位點和B位點分別是起始密碼子和終止密碼子對應的基因位置。選用的引物組合應為 引物1和引物4引物1和引物4。
（2）本實驗中，PCR所用的DNA聚合酶擴增出的MT基因的末端為平末端。由于載體E只有能產生黏性末端的酶切位點，需借助中間載體P將MT基因接入載體E。載體P和載體E的酶切位點及相應的酶切序列如圖1乙所示。
①選用 EcoRVEcoRV酶將載體P切開，再用 T4DNAT4DNA（填“T4DNA或“E?coliDNA”）連接酶將MT基因與載體P相連，構成重組載體P′。
②載體P′不具有表達MT基因的 啟動子啟動子和 終止子終止子。選用 XhoI和PstIXhoI和PstI酶組合對載體P′和載體E進行酶切，將切下的MT基因和載體E用DNA連接酶進行連接，將得到的混合物導入到用 鈣鈣離子處理的大腸桿菌，篩出MT工程菌。
（3）MT基因在工程菌的表達量如圖2所示。該結果仍無法說明已經成功構建能較強吸附廢水中重金屬的MT工程菌，理由是 尚未在個體生物學水平上對MT工程菌吸附重金屬的能力進行鑒定尚未在個體生物學水平上對MT工程菌吸附重金屬的能力進行鑒定。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】引物1和引物4；EcoRV；T4DNA；啟動子；終止子；XhoI和PstI；鈣；尚未在個體生物學水平上對MT工程菌吸附重金屬的能力進行鑒定
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：211引用：5難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6